Диагностические проблемы кариотипирования плода

Основными проблемами цитогенетической пренатальной диагностики являются:

контаминация материнскими клетками; /Контамина́ция (лат. contaminatio — смешение)/
"псевдомозаицизм" в КАЖ;
мозаицизм, ограниченный плацентой, в ворсинах хориона (плаценты);
структурные перестройки хромосом, возникшие de novo;
неидентифицируемые маркерные хромосомы.

Контаминация материнскими клетками
Образцы эмбрионального материала могут быть контаминированы клетками материнского происхождения. При длительном культивировании материнские клетки могут пролиферировать и приводить к диагностическим ошибкам. Риск ошибок, обусловленных контаминацией, составляет 0,16% при культивировании КАЖ и выше (до 0,4%) при культивировании клеток ворсин хориона . Избежать контаминации возможно лишь при сокращении времени культивирования или при использовании "прямого" метода приготовления препаратов.

"Псевдомозаицизм" в КАЖ
Различают три типа "псевдомозаицизма":

ограниченный одним участком колонии;
затрагивающий все метафазные пластинки одной колонии;
затрагивающий несколько колоний в пределах одной чашки.
При flask-методе под "псевдомозаицизмом" понимают наличие многочисленных клеток с однотипной хромосомной аномалией в пределах одного флакона. Частота "псевдомозаицизма", по суммарным данным различных лабораторий варьирует в пределах 0,6-1,0% .

Мозаицизм, ограниченный плацентой

Несоответствие (дискордантность) хромосомного набора в клетках зародышевых оболочек (хориона, амниона) и собственно эмбриона человека впервые описано Калушек . Авторы предположили, что на каждой стадии раннего эмбрионального развития возможно нерасхождение хромосом в любом митотическом делении, что может приводить к мозаичным кариотипам в клетках плаценты или плода, но не обязательно эти события совпадают. Серьезные проблемы возникают при обнаружении хромосомной аномалии (в мозаичной или полной форме) в "прямых" препаратах из ворсин хориона, которая не подтверждается при исследовании тканей абортированного плода. Ограниченный плацентой мозаицизм является источником диагностических ошибок в 1-2% исследований, основанных только на клетках ворсинчатого хориона.
Таблица Различные типы хромосомного мозаицизма у плодов с нормальным кариотипом
     Ткань                                                  Тип 1                                              Тип 2                                      Тип 3
Цитотрофобласт                         Aнеуплоидия (мозаичная или полная) Нормальный кариотип         Анеуплоидия (мозаичная или полная)
Мезенхимальиая ткань хориона Нормальный кариотип              Анеуплоидия (мозаичная или полная) Анеуплоидия (мозаичная или полная)
Ткани плода                         Нормальный кариотип              Нормальный кариотип                         Нормальный кариотип

Наиболее частым является мозаицизм типа 1. При этом типе практически не описано влияние на внутриутробное развитие плода. При типе 2 в некоторых случаях наблюдается синдром задержки развития плода. Наиболее редкий - тип 3, при котором беременность осложняется задержкой развития плода и/или его смертью.

Структурные перестройки хромосом, возникшие de novo

При обнаружении у плода, родители которого кариотипически нормальны, кариотипа со структурными перестройками хромосом возникает дилемма, поскольку невозможно полностью исключить микроперестройки, и, следовательно, несбалансированность хромосомного набора у плода. Такие случаи достаточно редки и встречаются с частотой 0,06-0,20% от всех пренатальных исследований. В первую очередь в такой ситуации необходимо подтвердить отцовство. Риск рождения ребенка с какими-либо аномалиями развития при кариотипе с истинными структурными перестройками, возникшими de novo, оценивается в 10%.

Маркерные хромосомы

При обнаружении в кариотипе плода маркерной хромосомы рекомендовано исследование кариотипа родителей для установления происхождения маркера и типа мозаицизма (полный или частичный).
Риск рождения ребенка с аномалиями развития различен в зависимости от того, унаследована ли маркерная хромосома от одного из родителей или она возникла de novo. В том случае, когда один из фенотипически нормальных родителей является носителем идентичной маркерной хромосомы, прогноз в отношении плода более благоприятен.
Для несемейных маркерных хромосом общий риск аномалий у плода составляет около 8% для сателлитных маркеров (содержащих короткие плечи акроцентрических хромосом, несущих рибосомные гены) и 27% - для несателлитных .
Если при идентификации маркерной хромосомы различными методами дифференциального окрашивания (G-, Q-, NOR-, DА/DАРI, FISH) выявлен эухроматиновый материал, это свидетельствует о частичной трисомии, что с большой вероятностью приведет к аномалиям у плода.
Особенно ценной является возможность точной идентификации природы маркерной хромосомы методом гибридизации in situ (FISH) с использованием наборов цельнохромосомных ДНК-проб.
http://bono-esse.ru/blizzard/Aku/Medlab … _ds_2.html